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熒光溶氧儀在微生物發(fā)酵與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中的技術(shù)適配與工藝優(yōu)化

更新時(shí)間:2025-12-05   點(diǎn)擊次數(shù):191次

生物工程作為現(xiàn)代生物技術(shù)的核心支柱,涵蓋微生物發(fā)酵、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)等關(guān)鍵領(lǐng)域,其核心目標(biāo)是通過調(diào)控生物代謝過程,高效生產(chǎn)抗生素、酶制劑、生物疫苗、重組蛋白等高價(jià)值生物制品。在生物反應(yīng)體系中,溶解氧(Dissolved Oxygen, DO)是影響微生物 / 細(xì)胞生長、代謝途徑及目標(biāo)產(chǎn)物合成的關(guān)鍵環(huán)境因子 —— 多數(shù)好氧微生物(如青霉素生產(chǎn)菌、枯草芽孢桿菌)的適宜溶氧濃度為 20%-80% 空氣飽和度(對(duì)應(yīng) 1.5-6.0 mg/L,25℃常壓下),動(dòng)物細(xì)胞(如 CHO 細(xì)胞、Vero 細(xì)胞)則需維持 30%-60% 空氣飽和度,溶氧濃度過高或過低均會(huì)導(dǎo)致代謝紊亂、產(chǎn)物合成受阻,甚至細(xì)胞凋亡。傳統(tǒng)溶氧監(jiān)測依賴極譜法電極,存在膜片易污染、需頻繁更換電解液、響應(yīng)滯后等缺陷,而熒光溶氧儀憑借其高精度、低干擾、長壽命的技術(shù)優(yōu)勢,已成為生物工程實(shí)驗(yàn)及工業(yè)化生產(chǎn)中溶氧監(jiān)測的重要設(shè)備,為工藝參數(shù)優(yōu)化與生產(chǎn)效率提升提供了關(guān)鍵技術(shù)支撐。

一、熒光溶氧儀的技術(shù)特性與生物工程適配性

(一)核心技術(shù)原理與改進(jìn)

熒光溶氧儀延續(xù)熒光猝滅原理,其探頭表面修飾的特異性熒光探針(如釕配合物)在藍(lán)紫光激發(fā)下發(fā)射紅色熒光,水中氧氣分子通過擴(kuò)散與熒光探針結(jié)合,引發(fā)非輻射能量轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致熒光強(qiáng)度衰減及熒光壽命縮短。儀器通過檢測熒光壽命變化(相較于強(qiáng)度檢測,抗光漂移能力更強(qiáng)),結(jié)合 Stern-Volmer 方程(I?/I = 1 + Ksv [O?],其中 I?為無氧時(shí)熒光強(qiáng)度,I 為有氧時(shí)熒光強(qiáng)度,Ksv 為猝滅常數(shù),[O?] 為溶氧濃度)精準(zhǔn)換算溶氧值。與傳統(tǒng)極譜法相比,熒光法無需施加極化電壓,避免了電極表面氧氣還原消耗,從根本上解決了 “耗氧性誤差" 問題,尤其適配生物工程中低溶氧、高黏度(如高糖發(fā)酵液)、高細(xì)胞密度的復(fù)雜體系。

(二)生物工程場景下的核心技術(shù)優(yōu)勢

  1. 高精度與寬量程適配:檢測精度可達(dá) ±1% 滿量程,分辨率 0.01 mg/L 或 0.1% 空氣飽和度,量程覆蓋 0-20 mg/L(0-200% 空氣飽和度),既能滿足微生物發(fā)酵的高溶氧需求,也能適配動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的低溶氧精準(zhǔn)調(diào)控;

  1. 抗干擾能力強(qiáng):不受發(fā)酵液中 CO?、NH?、有機(jī)溶劑、重金屬離子及表面活性劑的影響,且避免了極譜法電極因蛋白質(zhì)、多糖、細(xì)胞黏附導(dǎo)致的膜污染問題,適用于含高濃度底物、代謝產(chǎn)物及細(xì)胞碎片的復(fù)雜反應(yīng)體系;

  1. 快速響應(yīng)與實(shí)時(shí)監(jiān)測:熒光壽命檢測的響應(yīng)時(shí)間≤3 秒,遠(yuǎn)快于極譜法(10-30 秒),可實(shí)時(shí)捕捉生物反應(yīng)中溶氧濃度的瞬時(shí)波動(dòng)(如發(fā)酵前期微生物快速增殖導(dǎo)致的溶氧驟降),為工藝調(diào)控提供及時(shí)數(shù)據(jù)支撐;

  1. 低維護(hù)與長壽命:探頭無膜片、無電解液,維護(hù)周期長達(dá) 12-24 個(gè)月,僅需定期清潔熒光層,顯著降低生物反應(yīng)體系的污染風(fēng)險(xiǎn)(避免電解液泄漏污染培養(yǎng)液),適配生物工程對(duì)無菌環(huán)境的嚴(yán)格要求;

  1. 在線滅菌兼容性:工業(yè)級(jí)熒光溶氧儀探頭支持 121℃高壓蒸汽滅菌(SIP)或在線化學(xué)滅菌(CIP),可與發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器同步滅菌,滿足規(guī)?;a(chǎn)的無菌操作規(guī)范。

二、在生物工程核心場景中的關(guān)鍵應(yīng)用

(一)微生物發(fā)酵工藝優(yōu)化與生產(chǎn)調(diào)控

微生物發(fā)酵是生物工程中較成熟的應(yīng)用領(lǐng)域,涵蓋抗生素、酶制劑、氨基酸、生物乙醇等產(chǎn)品生產(chǎn),溶氧濃度的動(dòng)態(tài)調(diào)控直接影響發(fā)酵效率與產(chǎn)物收率。

  1. 發(fā)酵過程溶氧動(dòng)態(tài)監(jiān)測:在青霉素發(fā)酵中,產(chǎn)黃青霉的生長階段(0-48 小時(shí))需維持較高溶氧(60%-80% 空氣飽和度)以促進(jìn)菌絲體增殖,而產(chǎn)物合成階段(48-120 小時(shí))需將溶氧控制在 30%-50%,過高溶氧會(huì)導(dǎo)致青霉素降解酶激活。熒光在線溶氧儀可 24 小時(shí)連續(xù)監(jiān)測發(fā)酵罐內(nèi)溶氧變化,通過與攪拌轉(zhuǎn)速、通氣量、罐壓等參數(shù)聯(lián)動(dòng),構(gòu)建閉環(huán)控制系統(tǒng) —— 當(dāng)溶氧低于設(shè)定閾值時(shí),自動(dòng)提高攪拌轉(zhuǎn)速(增強(qiáng)氣液傳質(zhì)效率)或增大通氣量(提升氧氣供應(yīng)量),確保溶氧穩(wěn)定在優(yōu)區(qū)間;

  1. 底物代謝與產(chǎn)物合成關(guān)聯(lián)分析:在淀粉酶發(fā)酵中,枯草芽孢桿菌在碳源充足時(shí)快速耗氧,溶氧濃度降至低谷(“溶氧臨界點(diǎn)"),此時(shí)碳源耗盡,微生物開始轉(zhuǎn)向產(chǎn)物合成。通過熒光溶氧儀捕捉這一臨界點(diǎn),可精準(zhǔn)判斷補(bǔ)料時(shí)機(jī),避免因碳源不足導(dǎo)致的產(chǎn)酶效率下降,同時(shí)減少過量補(bǔ)料造成的代謝廢物積累;

  1. 異常發(fā)酵預(yù)警:發(fā)酵過程中若出現(xiàn)雜菌污染(如厭氧菌污染),會(huì)導(dǎo)致溶氧濃度異常下降且無法通過調(diào)控通氣 / 攪拌恢復(fù);若微生物代謝活力下降,溶氧濃度則會(huì)異常升高。熒光溶氧儀通過實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)異常報(bào)警,可及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染或菌種退化問題,降低生產(chǎn)損失。

(二)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中的溶氧精準(zhǔn)控制

動(dòng)物細(xì)胞(如 CHO 細(xì)胞用于單克隆抗體生產(chǎn)、Vero 細(xì)胞用于疫苗生產(chǎn))對(duì)溶氧濃度的敏感性遠(yuǎn)高于微生物,且細(xì)胞無細(xì)胞壁保護(hù),對(duì)剪切力(攪拌、通氣產(chǎn)生)耐受能力弱,溶氧調(diào)控需兼顧精準(zhǔn)性與溫和性。

  1. 低溶氧環(huán)境精準(zhǔn)維持:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜溶氧濃度為 30%-60% 空氣飽和度(對(duì)應(yīng) 2.2-4.5 mg/L),過高溶氧會(huì)產(chǎn)生過量活性氧(ROS),損傷細(xì)胞 DNA 與細(xì)胞膜;過低溶氧則會(huì)抑制線粒體呼吸鏈功能,導(dǎo)致細(xì)胞增殖停滯。熒光溶氧儀的高分辨率(0.1% 空氣飽和度)可實(shí)現(xiàn)低溶氧區(qū)間的精準(zhǔn)監(jiān)測,結(jié)合 “微泡曝氣" 或 “膜式通氣" 技術(shù),在不產(chǎn)生高剪切力的前提下,維持溶氧穩(wěn)定;

  1. 分批補(bǔ)料培養(yǎng)的溶氧聯(lián)動(dòng)調(diào)控:在單克隆抗體制備中,分批補(bǔ)料培養(yǎng)過程中需根據(jù)溶氧變化調(diào)整補(bǔ)料速率 —— 當(dāng)溶氧下降速率加快時(shí),表明細(xì)胞增殖活躍,耗氧量增加,需同步提高補(bǔ)料速率(補(bǔ)充葡萄糖、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì));當(dāng)溶氧下降速率減緩時(shí),提示細(xì)胞進(jìn)入平臺(tái)期,需降低補(bǔ)料速率,避免營養(yǎng)過剩導(dǎo)致的代謝廢物(如乳酸、氨)積累,提升抗體產(chǎn)率;

  1. 細(xì)胞凋亡預(yù)警:當(dāng)溶氧濃度長期低于 20% 空氣飽和度時(shí),動(dòng)物細(xì)胞會(huì)啟動(dòng)凋亡通路,通過熒光溶氧儀持續(xù)監(jiān)測,可提前預(yù)警凋亡風(fēng)險(xiǎn),及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)條件(如提高溶氧、添加抗凋亡試劑),延長細(xì)胞存活時(shí)間與產(chǎn)物合成周期。

(三)生物反應(yīng)體系氣液傳質(zhì)效率評(píng)估

氣液傳質(zhì)效率(以體積氧傳遞系數(shù) kLa 表示)是生物反應(yīng)器設(shè)計(jì)與工藝優(yōu)化的核心參數(shù),直接決定氧氣從氣相向液相的傳遞速率。熒光溶氧儀可通過 “動(dòng)態(tài)法" 快速測定 kLa:先將反應(yīng)器內(nèi)溶氧降至零(通入氮?dú)猓?,再通入空氣,記錄溶氧濃度隨時(shí)間的上升曲線,通過擬合公式 ln [(C*-C?)/(C*-C?)] = kLa?t(其中 C * 為氧飽和濃度,C?為初始溶氧濃度,C?為 t 時(shí)刻溶氧濃度)計(jì)算 kLa 值。通過比較不同攪拌轉(zhuǎn)速、通氣量、發(fā)酵液黏度下的 kLa 值,可優(yōu)化反應(yīng)器操作參數(shù),提升氣液傳質(zhì)效率,為高細(xì)胞密度培養(yǎng)提供充足氧氣供應(yīng)。

相關(guān)產(chǎn)品

智感環(huán)境便攜式熒光溶氧儀依托優(yōu)化的熒光猝滅核心技術(shù),搭載自主研發(fā)的非消耗性高性能熒光膜片,通過檢測氧分子導(dǎo)致的熒光信號(hào)相位差來反推溶解氧濃度,無需電解液且無需頻繁校準(zhǔn),從根源解決了傳統(tǒng)電極法耗氧、易污染等痛點(diǎn),其響應(yīng)速度快(T90≤40s),在 0 - 20mg/L 量程內(nèi)測量精度達(dá) ±0.1mg/L,還內(nèi)置高精度傳感器可實(shí)現(xiàn)溫度甚至鹽度的自動(dòng)補(bǔ)償,能在 - 20℃~50℃等寬溫及高鹽、強(qiáng)酸堿等復(fù)雜工況下穩(wěn)定工作。該儀器兼具工業(yè)級(jí)固定安裝與輕量化手持便攜等款式,不僅具備防腐密封、抗污染的工業(yè)級(jí)設(shè)計(jì),適配化工、制藥、水處理等行業(yè)的固定監(jiān)測需求,也有重量≤500g、IP68 及以上防水等級(jí)、長續(xù)航等便攜特性,適配水產(chǎn)養(yǎng)殖巡檢、野外應(yīng)急監(jiān)測等場景,同時(shí)支持?jǐn)?shù)據(jù)實(shí)時(shí)上傳與多設(shè)備組網(wǎng)管理,廣泛助力各領(lǐng)域?qū)崿F(xiàn)溶氧精準(zhǔn)監(jiān)測與工藝優(yōu)化,大幅降低運(yùn)維成本。

智感環(huán)境在線式溶氧儀是一款基于熒光猝滅技術(shù)的國產(chǎn)高精度水質(zhì)監(jiān)測設(shè)備,核心通過藍(lán)光激發(fā)熒光物質(zhì)并利用氧分子對(duì)熒光的猝滅效應(yīng)實(shí)現(xiàn)溶解氧濃度檢測,摒棄了傳統(tǒng)電化學(xué)方法的電解液與極化操作,從原理上規(guī)避了耗氧、水體污染及頻繁維護(hù)的弊端。該儀器測量范圍為 0 - 20mg/L,精度達(dá) ±0.2% FS,分辨率低至 0.01mg/L,響應(yīng)時(shí)間≤40 秒,內(nèi)置溫度傳感器并支持鹽度、大氣壓補(bǔ)償,可有效抵消環(huán)境干擾確保數(shù)據(jù)可靠性;傳感器搭載抗生物污染涂層及自動(dòng)清潔刷設(shè)計(jì),大幅降低微生物附著與運(yùn)維成本。在功能層面,設(shè)備兼容 RS485/Modbus - RTU 協(xié)議,可聯(lián)動(dòng)多參數(shù)水質(zhì)傳感器實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)實(shí)時(shí)上傳與遠(yuǎn)程監(jiān)控,搭配 IP68 高防護(hù)等級(jí)的防腐密封結(jié)構(gòu),支持浸入式安裝,適配浮標(biāo)、臺(tái)站、船載等多元監(jiān)測平臺(tái),同時(shí)配備溶氧超限、設(shè)備故障等多重報(bào)警機(jī)制,無需人工值守即可實(shí)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警。目前,該儀器已廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖、污水處理、飲用水凈化、自然水體監(jiān)測及工業(yè)制程水質(zhì)把控等領(lǐng)域,為水質(zhì)調(diào)控、生態(tài)預(yù)警與工藝優(yōu)化提供了精準(zhǔn)、穩(wěn)定的技術(shù)支撐。

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